根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，将上述1：10的检样稀释液再做成几个适当的10倍递增稀释液。即取1：10稀释液1ml与9ml稀释液混和做成1:100的稀释液，然后依次递增稀释，做成1：1 000、1：10000等稀释液。注意每递增稀释一次，必须另换1支1ml灭菌吸管，这样所得检样的稀释倍数方为准确。
从吸管筒内取出灭菌吸管时，不要将吸管碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分；而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。
在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液面2.5cm；吸入液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管离开液面，将贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要求的刻度，这样取样较准确，而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。
当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的试管内时，应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管外侧部分粘附的检液也混入其中。检样稀释时,无菌称取(或量取)有代表性的样品25g(或ml)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成1:10的稀释液。制备10倍系列稀释的样品匀液时，每一步都应该摇匀试管或反复吹吸，使菌体能够尽量分散均匀。如系肉、鱼等固体样品，剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中，以8000-10000rpm速度搅拌1分钟，使做成均匀的1：10稀释液。对于像食醋或酸性饮料等酸度较高的样品，如果直接用原样液来检测菌落总数，结果会偏低甚至为0 ，只有严格按标准要求先用灭菌的20-30%碳酸钠溶液将其PH值调至中性后方可准确检测出菌落总数[3]。
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